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2024-06-11

肝素鈉分子呈與分子量分布

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照分子排阻色譜法(通則0514)測定。
供試品溶液:取本品適量,加流動相溶解并稀釋制成每1mL中約含5mg的溶液。
對照品溶液:取肝素分子量對照品適量,加流動相溶解并稀釋制成每1mL中約含5mg的溶液。
系統(tǒng)適用性溶液:取肝素分子量系統(tǒng)適用性對照品適量,加流動相溶解并稀釋制成每1mL中約含5mg的溶液。
色譜條件:以親水改性鍵合硅膠為填充劑(TSK預柱,6mm×40mm,TSKgel G4000SWXL,7.8mm×300mm,TSKgel G3000SWXL,7.8mm×300mm,串聯(lián)使用),以0.1mol/L醋酸銨溶液為流動相,流速為每分鐘0.6mL,柱溫為30℃,示差折光檢測器,進樣體積25μL。
系統(tǒng)適用性要求:系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中,主峰與溶劑峰能夠徹底洗脫,重均分子量應在標示值±500范圍內(nèi)。
測定法:取對照品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。準確計算對照品溶液色譜圖中肝素峰的總面積(不包括鹽峰)及每個點的累積峰面積百分比,確定與肝素分子量對照品附帶的寬分布標樣表中累積峰面積百分比最接近點的保留時間及對應的分子量,以保留時間為橫坐標,分子量的對數(shù)值為縱坐標,使用GPC軟件,擬合三次方程,建立校正曲線,相關系數(shù)應不小于0.990。
另取供試品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按下式計算本品的重均分子量。
式中,RIi為洗脫的i級分的物質(zhì)量,即示差色譜圖的峰高;
Mi為由校正曲線計算得出的i級分的分子量。
限度:重均分子量應為15000~19000,分子量大于24000的級分不得大于20%,分子量8000~16000的級分與分子量16000~24000的級分比應不小于1.0。

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